随着消毒行业的快速发展，消费者对消毒剂的要求不再局限于即时杀菌效果，更关注其长效抑菌能力。WS/T10051-2026《消毒剂持续消毒效果实验室评价方法》作为我国卫生行业的重要标准，为科学评估消毒剂的持续消毒作用提供了统一、规范的技术依据。该标准由国家疾病预防控制局发布，将于2026年12月1日正式实施，对推动消毒产品质量提升、保障公共卫生安全具有重要意义。

　　一、标准制定背景与适用范围

　　1.1制定背景

　　传统的消毒剂效果评价主要关注即时杀菌能力，但在实际应用场景中，物体表面往往会反复受到微生物污染。具有持续消毒作用的消毒剂能够在较长时间内保持杀菌活性，有效减少消毒频次，降低使用成本。然而，长期以来我国缺乏统一的持续消毒效果评价方法，导致市场上各类"长效消毒"产品质量参差不齐，消费者难以辨别。

　　WS/T10051-2026标准的出台，填补了这一技术空白，为消毒剂持续消毒效果的实验室评价提供了科学、规范、可操作的方法体系，有助于规范消毒产品市场，促进行业健康发展。

　　1.2适用范围

　　本标准规定了消毒剂持续消毒效果实验室评价的试验方法、评价规定和注意事项，适用于消毒剂对硬质无孔物体表面的持续消毒作用实验室效果评价。

　　所谓硬质无孔物体表面，是指物理结构坚硬、致密，表面和内部无空隙，液体、气体等难以渗透吸附，仅能附着于表面的物体接触面，常见的如金属、塑料、玻璃等表面。这类表面在日常生活和医疗环境中广泛存在，也是病原微生物传播的重要媒介。

　　二、核心术语与定义

　　2.1持续消毒作用

　　持续消毒作用，又称长效消毒作用，是指消毒剂在较长时间（≥24小时）对物体表面的微生物仍具有杀灭能力的现象。这是评价消毒剂长效性能的核心指标，也是本标准所要测定的关键参数。

　　2.2初始接种、再接种与最终接种

　　标准中定义了三种接种方式，构成了完整的试验流程：

　　初始接种：用于擦拭循环过程的载体，经压力蒸汽灭菌后滴染一定量菌悬液和有机干扰物的过程，是试验的起点。

　　再接种：在擦拭循环过程中对染菌载体重复添加一定量菌悬液和有机干扰物的过程，模拟实际使用中表面反复受到污染的情况。

　　最终接种：在一个完整擦拭循环结束后，向染菌载体添加一定量菌悬液和有机干扰物的过程，用于评估经过多次擦拭后消毒剂的残留杀菌能力。

　　这三种接种方式的组合，能够更真实地模拟消毒剂在实际使用场景中的持续消毒效果。

　　三、试验方法详解

　　3.1试验器材准备

　　3.1.1试验菌株

　　标准规定的基础试验菌株为金黄色葡萄球菌（ATCC6538）和大肠杆菌（8099），分别代表革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，是消毒效果评价中最常用的指示菌。根据消毒剂的特定用途或试验的特殊需要，还可增选其他菌株，以满足不同产品的评价需求。

　　3.1.2染菌载体

　　试验采用直径24.0mm±0.1mm、厚度1.0mm的光滑不锈钢圆片作为染菌载体。不锈钢片需按照相关标准要求进行处理后，经压力蒸汽灭菌备用。选择不锈钢作为载体材料，是因为它是硬质无孔表面的典型代表，在医疗、食品加工等领域应用广泛。

　　3.1.3试剂与仪器

　　试验所需试剂包括胰蛋白胨生理盐水溶液（TPS）、磷酸盐缓冲液（PBS）、0.6%牛血清白蛋白（0.6%BSA）、营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）、标准硬水、中和剂等。其中中和剂必须经过鉴定试验合格，确保能有效中和消毒剂的残留作用，同时对试验菌株无抑制作用。

　　仪器耗材包括离心管、砝码、擦拭布、镊子、恒温水浴箱、电动混匀器、浊度计、恒温培养箱、刻度吸管、移液器及配套枪头等。

　　3.2试验步骤

　　3.2.1菌悬液制备

　　按照相关标准要求完成试验菌株的复苏、传代和培养，取第3代至第8代的新鲜斜面培养物，稀释至适宜浓度制备三种接种培养物：

　　初始接种和最终接种培养物：菌量为1×10⁸CFU/mL~5×10⁸CFU/mL

　　再接种培养物：菌量为1×10⁶CFU/mL~5×10⁶CFU/mL

　　将各培养物分别与0.6%牛血清白蛋白按照1:1体积比混合，制成相应的接种菌悬液。牛血清白蛋白作为有机干扰物，模拟实际环境中有机物对消毒效果的影响。

　　3.2.2染菌载体制备

　　试验组与阳性对照组均设置2个平行样。取4片经灭菌干燥后的不锈钢片，分别吸取10μL初始接种菌悬液于钢片中心，用无菌接种环扩散至距钢片边缘0.5cm处，36℃±1℃干燥10分钟后备用。其中2片作为试验组，另外2片作为阳性对照组。

　　3.2.3预处理

　　将染菌载体放入无菌平皿中，染菌面朝上。向试验组不锈钢片中心滴加0.1mL消毒剂（按说明书使用浓度），向对照组滴加0.1mL标准硬水，室温静置24小时使其自然晾干。这一步模拟了消毒剂涂布后24小时的初始状态。

　　3.2.4擦拭程序

　　擦拭程序是本标准的核心环节，通过模拟实际使用中的擦拭摩擦，评估消毒剂的持久性。

　　干擦拭：将不锈钢片固定在平皿中，染菌面朝上。将装有210g砝码的擦拭装置垂直放置在钢片表面，仅施加水平方向作用力，使离心管前后各移动一次，完成一次干擦拭。

　　干擦拭后再接种：吸取10μL再接种菌悬液于钢片中心，扩散后置于36℃±1℃培养箱至干燥。

　　湿擦拭：制作新的擦拭装置，用标准硬水在距离擦拭布75cm处喷水两次，然后按照干擦拭的方法进行一次湿擦拭。

　　湿擦拭后再接种：室温放置约1分钟至钢片表面完全干燥，然后进行再接种。

　　一个完整的擦拭循环包括干擦拭、干擦拭后再接种、湿擦拭和湿擦拭后再接种。试验需要完成两次完整擦拭循环，在第三个擦拭循环进行湿擦拭后，室温干燥1分钟，进入最终接种流程。

　　3.2.5最终接种与结果测定

　　吸取10μL最终接种菌悬液滴加于不锈钢片中心，扩散后作用10分钟。然后将试验组钢片放入含中和剂的离心管中，阳性对照组放入含0.1%吐温PBS的离心管中。充分振荡洗脱，取洗脱液稀释后接种于平皿，36℃±1℃培养48小时，计数菌落数。

　　同时设置阴性对照，分别吸取标准硬水、中和剂和稀释液各1.0mL接种平皿，每份样本接种两个平皿。

　　四、评价规定

　　4.1合格判定标准

　　试验需重复三次，各次试验的杀灭对数值均大于或等于3.00，则可判定该消毒剂具有24小时持续消毒作用。杀灭对数值的计算公式为：

　　KL=N₀-Nₓ

　　其中KL为杀灭对数值，N₀为对照组平均活菌浓度的对数值，Nₓ为试验组平均活菌浓度的对数值。

　　杀灭对数值≥3.00意味着消毒剂能够杀灭99.9%以上的微生物，这是消毒效果评价中的重要阈值。

　　4.2对照组要求

　　为确保试验结果的有效性，对照组必须满足以下要求：

　　阴性对照组：应无菌生长，证明试验环境和试剂无污染。

　　阳性对照组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的回收菌落数应为1×10⁶CFU/片～5×10⁶CFU/片，确保接种菌量在适宜范围内。

　　只有当对照组结果符合要求时，试验结果才有效。