体外抗菌活性检测是一种实验室方法，用于评估抗菌剂（如抗生素、消毒剂、防腐剂等）对细菌或真菌的抑制或杀灭能力。这种检测对于开发新抗菌药物、评估现有抗菌产品的效能以及研究细菌对抗菌剂的耐药性具有重要意义。

    体外抗菌活性检测测定微生物对药物敏感程度，分为抑菌实验和杀菌实验，前者是抑制细菌的生长繁殖，但不能杀菌，在药物去除后，微生物还可以继续生长；后者是能杀死微生物，在药物去除后，微生物不能再生长繁殖。

    中科检测开展各种原料及产品的体外抗菌活性检测服务，具备CMA、CNAS资质认证，检测报告可用于原料及产品备案及产品研发，贸易凭证等。

    液体培养抑菌检测（OD值测量）

    分别于LB培养基中220rpm，37℃条件下培养大肠杆菌DH5α至OD600为0.6左右，对应108个CFU/mL的浓度，按1:1000的稀释比例将菌液稀释至终浓度为105个CFU/mL，分别将15w紫外照射灭菌20分钟的待测样品加入到3mL的菌液中（每组设定两个平行重复，样品均完全浸没于菌液中），37℃，220rpm条件下培养24h后测定OD值。

    对接注意事项：

    1）样本自带对于OD测试有有影响的因素，对于实验结果有影响；

    2）默认三次重复，确认待测样本的实验用量；

    3）对于块体样本，计算好客户提供样本数量；

    固体平板培养基抑菌检测（抑菌圈测量）

    分别于LB培养基中220rpm，37℃条件下培养大肠杆菌DH5α至OD600为0.6左右，108个CFU/mL的浓度，以1:1000的体积比将菌液和融化的固体培养基混合，每个培养皿（直径为90mm）中倒入10mL混合培养基，凝固后备用。分别加入待测样品，37℃培养24小时候拍照。

    实验方法：a.直接接触法；b.滤纸片法；c.打孔法；d.挖沟法

    最小抑菌浓度(MIC)测试

    即在微生物鉴定的稀释法中以在试管内或小孔内能够完全抑制细菌生长的最低药物浓度为最小抑菌浓度。它是将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌样品稀释两倍后进行测量。

    样品加入到LB液体中形成均匀的悬浮液,然后两倍稀释成不同的浓度。

    每个1毫升的培养基含有不同浓度的测试样本接种0.1毫升106CFU/ML细菌悬液,37℃下震荡培养24小时，然后观察细菌的生长，不加抗菌样品的试管作为对照，无菌生长的实验管液体透明，以不长菌管的抗菌剂量为该抗菌剂的MIC。

    最低杀菌浓度(MBC)测试

    即杀死99.9%（降低3个数量级）的供试微生物所需的最低药物浓度。对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌样品被两倍稀释法测量。样品加入到LB液体中形成均匀的悬浮液,然后两倍稀释成不同的浓度。

    每个1毫升的培养基含有不同浓度的测试样本接种0.1毫升106CFU/ML细菌悬液,37℃下震荡培养24小时，然后观察细菌的生长，不加抗菌样品的试管作为对照，无菌生长的实验管液体透明，取其中0.1ml培养液涂布新鲜琼脂平板，37℃下培养24h,观察无菌落生成，无菌落生成的最低样品浓度计量为该抗菌剂的MBC。

    平板涂布计算菌落数（抑菌率测定）

    它作为一种操作方法经常出现在微生物学实验之中。我们将含菌材料直接加到温度较高的培养基中容易使某些热敏感菌失去活性，同时，通过稀释倒平板法也会造成好氧菌被固定在琼脂中间，缺乏氧气而影响其活性，故在微生物学研究中稀释涂布平板法是一种比较常用的分离方法。

    实验案例：首先分别于LB培养基中220rpm，37℃条件下培养两种菌体（大肠杆菌DH5α，金黄色葡萄球菌CMCC26003）至OD600为0.6左右，对应108CFU/mL的浓度。随后将25μL浓度约为107CFU/mL的细菌悬浮液滴加到一块2.54cm×2.54cm的棉织物中间位置，然后将另外一块相同大小的棉织物放在上面，并用重物压紧使得细菌和棉织物能够充分接触。经过5、10和30min的接触时间后，然后将这两块棉纤维加入到含有一定浓度的硫代硫酸钠溶液（这个硫代硫酸钠溶液中包含有9.5mL的磷酸缓冲液和0.5mL的0.05M的硫代硫酸钠溶液）的离心管中，4500g，离心240s。离心结束后将棉织物取出，然后吸取离心管中的溶液100μL此打到铺有琼脂的平板上接种到营养琼脂培养板上，在37℃温度下培养24h，通过菌落计数法来评价抗菌性能。