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振荡烧瓶试验如何测定最小抑菌浓度?振荡烧瓶试验原理介绍
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  • 2024-08-16

    振荡烧瓶试验是一种用于确定抗(抑)菌剂抑制受试菌生长的最低浓度的实验方法。这种试验方法将不同浓度的抑菌剂混合溶解于营养肉汤培养基中,然后接种细菌,通过观察细菌的生长情况来确定最小抑菌浓度(MIC)。振荡烧瓶试验应用在非溶出性抗菌织物的抗菌效果检测中,通过该方法可以对织物的抗菌性能进行科学评价。




    作为第三方检测中心,中科检测机构拥有CMA和CNAS认证检测资质,检测设备齐全,数据科学可靠,可出具国家认可的振荡烧瓶试验报告。


    振荡烧瓶试验原理


    在液体中通过快速长时间振荡,增加微生物与抗(抑)菌产品内抑菌剂的接触以显示其抑菌作用。试验根据抑菌率大小判断其是否具有抑菌能力。本试验适用于对非溶出性抗(抑)菌织物的鉴定。


    振荡烧瓶试验器材


    (1)金黄色葡萄球菌 (ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌 (ATCC 10231) 菌悬液制备。根据抑菌剂特定用途也可用其他菌悬液。


    (2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH 值 7.2~7.4)


    (3)振荡摇床 (300r/min)


    (4)三角烧瓶


    (5)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)与沙堡琼脂培养基


    振荡烧瓶试验操作程序


    (1)将抗菌物品剪切成 10mm×10mm 样片,称取 0.75g 分装包好。


    (2)将 0.75g 样片放入 250ml 的三角烧瓶中,分别加入 70ml PBS 和 5ml 菌悬液,使菌悬


    液在 PBS 中的浓度为 1×104cfu/ml~5×104cfu/ml。


    (3)将三角烧瓶固定于振荡摇床上,在作用温度为 20℃~25℃的条件下,以 300r/min振摇 2min。吸取 1.0 ml 用 PBS 作适当稀释只至 10-2,作为试验组震荡前样液。


    (4)将 0.75g 样片放入上述含有 70 ml PBS 和 5ml 菌悬液的三角烧瓶中,然后将三角烧瓶固定于振荡摇床上,在作用温度为 20℃~25℃的条件下,以 300r/min 振摇取 0.5ml 振摇 1h。


    吸取 1.0 ml 样液,或用 PBS 作适当稀释后作为试验组振荡后样液。


    (5)分别吸取振荡前和振荡后样液各 1.0ml,以琼脂倾注法接种平皿,每个样液接种两


    个平皿,按照 2.1.1.3 规定的方法进行活菌培养计数。


    (6)试验同时设阴性对照样片和不加样片组。对照样片组以不含抗菌剂的材质、大小相


    同的样片代替抗菌样片外,其它操作程序均与试验组相同。不加样片组分别取 5ml 菌悬液和70mlPBS 加入 250ml 三角烧瓶中,混匀,分别于振荡前和振荡后 1h,各取 1.0ml 菌悬PBS的混合液做适当稀释。按 规定进行活菌培养计数。


    (7)试验重复 3 次,按公式计算抑菌率


    振荡烧瓶试验评价规定


    (1)不加样片组活菌计数在 1×104cfu/ml~5×104cfu/ml,且样本振荡前后平均菌落数差值在10% 以内,试验有效。


    (2)试验样片抑菌率与对照样片抑菌率的差值 > 26%,即可认定该样片具有抗菌作用。