化妆品的保湿是指用于补充或有助于保持施用部位水分含量；有助于减少施用部位的水分流失。保湿功效是化妆品最容易实现的功效。甘油，这些化妆品最基本的原料或多或少都具有一定的增加皮肤含水量的作用，在产品开发阶段保湿功效评价非常重要。

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    体外功效评价：天然保湿因子

    天然保湿因子（NaturalMoisturizingFactor，NMF）是存在于角质层内与水结合的一些低分子量物质的总称，包括氨基酸、吡咯烷酮羧酸、乳酸、尿素、尿刊酸、离子碳水化合物、氨、多态、葡糖胺及其他未知物质，是一类皮肤自身存在的、具有吸水特性的小分子复合物。与皮肤水合作用密切相关的NMF中最具代表性的为PCA、UCA、Urea，可以吸收大量的水分并保持水分不被散失。NMF作为一种低分子量水溶性的高效吸湿性分子化合物，能帮助角质细胞吸收水分，维持水合功能。

    对NMF的定量测试常见的方法为：1.利用胶带剥脱，采用高效液相色谱、液相色谱质谱联用技术，对剥脱下的角质层细胞中UCA、PCA等成分进行分析，2.基于保湿的原理，从二维\三维细胞水平检测与保湿相关基因的表达情况，利用3D皮肤模型直接检测皮肤角质层中PCA、UCA、Urea的含量变化，再利用相似相容原理，采用高效液相色谱对角质层PCA、UCA、Urea进行分离和检测。

    体外功效评价：皮肤屏障相关蛋白及其基因表达

    人体正常的皮肤有两方面的屏障功能：一方面抵御外界各种物理、化学和生物等有害物质对皮肤的侵害，对酸、碱、有机溶剂及物理性摩擦具有一定的抵抗力；另一方面对外界物质的吸收、内部物质的流失具有明显的限制作用，可阻止体液外渗与化学物质的内渗，防止水分散失。皮肤屏障受损表观上将会导致细胞连接松散、易脱落，细胞间紧密连接能力变弱，角质细胞表面TEWL升高，皮肤保水能力下降，皮肤变的敏感、脆弱。所以，皮肤屏障功能在保持机体内环境的稳定上起着重要的作用。

    皮肤屏障功能主要依靠角质层的“砖墙结构”。角质层的主要成分是角蛋白和脂质紧密有序的排列。所以，对皮肤屏障功能的检测可以通过测定相关蛋白的表达间接反应皮肤的水合力、保水力。与皮肤屏障直接相关的蛋白主要包含：角蛋白、丝聚合蛋白、外皮蛋白、兜甲蛋白、转谷氨酰胺酶、紧密连接蛋白-1等。其检测方法主要包含：定量即时聚合酶链式反应（QuantitativeReal-timePolymeraseChainReaction，qRT-PCR）、免疫细胞化（Immunocytochemistry，ICC）/免疫荧光（Immunofluorescence，IF）、免疫组化。

    体外功效评价：水通道蛋白

    皮肤固有的水合能力不仅由于角质细胞中NMF的存在，还依赖于皮肤内水分的运输。水通道蛋白（Aquaporins，AQPs）是一类膜蛋白家族，可选择性地转运水和小分子溶质（如甘油）。

    在人体皮肤中，AQP-3是AQPs家族表达最丰富的水通道蛋白亚型。其在表皮的表达量具有空间层次，主要表达于人表皮基底层，棘层、颗粒层，到角质层逐渐消失。AQP-3在基底膜带的高表达，可以促使水，甘油及尿素的转运，担负着角质层甘油运输的重要作用。AQP-3将内源性的甘油以及皮脂腺中的甘油三酯运输进入表皮，使其直接或间接影响皮肤保湿功效。

    通过抗原抗体的特异性结合，可以用荧光基团标记出表皮细胞表达的AQP3，荧光强度即对应了该蛋白的表达量，同时，通过定量即时聚合酶链式反应测定其mRNA的表达，从而可以一定程度上反映出皮肤转运水分的能力。