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2025-01-08
目前,产品在上市前预测用于阴道使用的个人护理、化妆品和药品对人体的影响,多用阴道粘膜刺激实验来证明,并且多为动物实验。然而,动物实验对于其他种类的贴身护理品的安全评估则有所欠缺,如婴儿纸尿片、尿失禁患者护理品和化妆品(女性用除臭剂、保湿剂、湿纸巾、润滑剂和盆浴以及身体清洗产品等)。而且,在3R原则之下,毒理学领域越来越关注体外替代方法的开发和使用,化妆品和化学品的动物替代实验已得到认可并广泛实施。
作为第三方检测中心,中科测试机构拥有CMA和CNAS认证检测资质,检测设备齐全,数据科学可靠,可出具国家认可的卫生用品阴道黏膜刺激试验报告。
刺激试验:细胞培养系统
体外细胞培养已广泛用于化学品和生物活性物质的细胞毒性筛查中,如角质细胞毒性试验预测急性经口毒性的LD50,大肾细胞荧光素漏出试验检测眼刺激性、3T3中性红摄取试验预测化合物的光毒性等已得到法规的认可。这些都为细胞培养在阴道刺激评估实验中的应用提供了借鉴。
人阴道上皮细胞的培养比较困难,现在多采用来自人阴道和宫颈上皮的永生化或转化的细胞系,这些细胞系的表型与正常细胞非常相似,如宫颈细胞Ect1/E6E7、子宫内膜细胞End1/E6E7 和阴道上皮细胞Vk2/E6E7等。细胞培养已经用于杀精剂的毒性机制研究中,如研究发现在短期和长期暴露中,对于N9造成的细胞死亡,End1/E6E7细胞比Vk2/E6E7更为敏感。体外细胞实验也可用于预测阴道接触产品的黏膜毒性,如依据细胞活性和细胞因子的释放定量分析阴道杀菌避孕药的毒性。
刺激试验:体外重建三维组织
组织工程技术的发展使体外重建组织模型越来越多地应用于毒理学和功效检测领域,如重建皮肤模型已用于皮肤刺激/腐蚀性、皮肤吸收和光毒性的检测、重建角膜模型用于眼刺激检测等。重建组织展示出与体内组织形态学、超微结构和功能等相同的特点。与皮肤相比,阴道黏膜上皮的微环境非常复杂,而且将巨噬细胞、淋巴细胞和朗格汉斯细胞等整合在一起的模型构建起来还有很多困难,没有血管的模型也难以模拟炎症反应的整个过程。尽管如此,阴道黏膜的体外重建近年来已取得了一些进展。仅含黏膜层的重建模型含有多层角质细胞,具有完整的黏膜屏障,可用于活性成分和最终配方的检测,也不受剂型的影响。
如MatTek 公司生产了多种类型的阴道上皮模型,以正常人子宫颈阴道部上皮细胞(VEC)为种子细胞,多层高度分化的上皮结构与正常人的组织非常相似,有的模型还加入了LC细胞。如VEC-100模型是含有多层分化细胞的阴道上皮模型,VEC模型已经用于女性卫生用品、阴道护理品和杀菌剂的毒性研究。
瑞士CELLnTEC公司提供了一种体外大鼠的重构系统,采用发情时期的相关细胞,据称该模型结构复杂并高动态的模拟了处于发情期大鼠的阴道上皮细胞。但还没有该模型用于刺激性研究的报道。
刺激试验:共培养模型
采用来源于人的宫颈或阴道组织,利用嵌入式器官培养的技术构建器官型宫颈或阴道组织模型,降低了三维重建组织对于技术要求的复杂程度,适宜于普通实验室研究和检测应用。如Gupta采用宫颈组织与外周血单核细胞的共培养模型,研究了防御素RC-101的毒性及阻止HIV-1病毒跨黏膜转移的作用。
三维组织模型应用于阴道接触物质的测试已进行了一些尝试,也显示出了一些很有前景的结果,它弥补了现有动物实验和单层细胞培养体系的许多缺点。检测指标不仅包括暴露受试物后的细胞活性,IL-1β和IL-8的联合释放,还可寻找和使用更多的生物标志物,如上皮完整性(P-选择素)、蛋白酶(如CCL2、MCP-1,MIP-1α)、炎症介质(IL-1α,IL-6,TNF-α)等,可更好地指示黏膜炎症和刺激作用。
刺激试验:外植体
人和动物的离体组织可用于阴道黏膜毒性的评估,但是通过女性治疗性的子宫切除术获得外植体比较困难,多数用于研究艾滋病毒感染的早期作用机制,或用于候选杀菌剂的潜伏期和临床前期的评估。
实验动物中,猪与人的阴道组织有着重要的共同点,例如,黏膜层由复层鳞状上皮和结缔组织组成,猪的阴道上皮细胞结构也与人类相似,包括构成通透屏障的膜包衣颗粒和细胞间脂质(包括神经酰胺、葡萄糖基神经酰胺和胆固醇等)。因此,猪阴道黏膜作为是个人护理品和女性用品安全筛查的体外替代模型,而且猪的组织也相对容易获得。但也有研究指出,猪和人的阴道黏膜组织对多种测试材料的渗透性存在差异。
例如,当测试亲水分子时,猪的阴道黏膜是人体体外模型组织渗透性的最精确替代模型。但是对于亲脂性物质,如后叶催产素,猪的模型比同等的通过人阴道黏膜的估计值要高出53%。与人类外植体一样,离体动物组织活力的长期培养维持可能仍存在局限。

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