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消毒产品抑菌试验详解:载体抑菌试验和抑菌环试验
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  • 2023-07-13

抑菌实验通常又称作抑菌圈实验、抗菌试验或药敏实验,一般是用于检测某种物质对于某种或多种细菌生长效力的抑制作用。消毒产品的原料配方不同,杀菌抑菌效果也会有不同。


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中科检测可开展消毒产品抑菌试验服务,出具的消毒产品抑菌试验报告具有CMA资质。


载体抑菌试验


适用消毒产品:适用于含溶出性抑菌成分的湿巾、无纺布口罩、卫生巾、护垫、尿布等固体类抑菌产品对微生物抑菌效果的测定。


取试验菌24h新鲜斜面培养物用PBS洗下,用PBS稀释至约105 CFU/mL~106 CFU/mL,制成菌悬液备用。


用灭菌剪刀在无菌条件下将试验样品和对照样品分别剪成20 mm×30 mm样片备用。试验时滴加0.1 mL菌悬液。对照样片染菌前需经压力蒸汽灭菌。


取无菌平皿,用无菌镊子取2片试验样片,勿重叠,置20℃±1℃水浴5min,在每一样片上滴加0.1 mL试验用菌悬液,立即计时。


待试验菌与样片接触作用至说明书的规定时间,分别夹取染菌样片加于5.0 mLPBS试管中,混匀。振荡洗脱,分别吸取1.0 mL样液,按活菌培养计数方法测定存活菌数,每管样液接种2个平皿。


如平板上生长的菌落数较多时,可10倍系列稀释后,再进行活菌培养计数。同时用与试验样品同质材料不含抑菌成分的对照样片2片代替试验样片进行试验,作为阳性对照,阳性对照回收菌量为1.0×104 CFU/片~9.0×104 CFU/片;取同批次PBS、培养基作阴性对照。所有试验样本和对照样本均在36℃±1℃培养,细菌繁殖体培养48h、白色念珠菌培养72h观察最终结果。试验重复3次,计算抑菌率。


抑菌环试验


适用消毒产品:含溶出性抑菌物质,可制成直径为5 mm片状物的固体抑菌产品的抑菌效果鉴定;也可用于鉴别抗抑菌样品中是否含有可溶性抑菌物质。


将试验菌24h新鲜斜面培养物用PBS洗下,稀释至5.0×105 CFU/mL~5.0×106 CFU/mL备用。


抑菌片的制备:溶出性固体抑菌产品,直接制成直径为5 mm,厚度不超过4 mm圆片(块),每4片为一组。阴性对照样片的制备:取同种材质不含抑菌成分的样本,制成与试验组大小相同的圆片(块)。


用无菌棉拭子蘸取浓度为5.0×105 CFU/mL~5.0×106 CFU/mL试验菌悬液,在适宜的培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次,平板应转动60°,最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿,置室温干燥5min。


每次试验贴放1个染菌平板,每个平板贴放4片试验样片,1 片阴性对照样片,共5片。


用无菌镊子取样片贴放于平板表面,阴性对照样片贴于平板中心位置,试验样片贴于四周,贴放好后,用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。各样片中心之间相距25 mm以上,与平板的周缘相距15 mm以上。


盖好平板,置36℃±1℃培养16h~18h观察结果,试验重复3次。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录,测量抑菌环时,应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行,测量其直径应以抑菌环外沿为界。


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