目前检测抗（抑）菌产品对细菌、真菌的抗（抑）菌作用的常用试验方法有抑菌环试验、最小抑菌浓度测定试验等。其中抑菌环试验是最常用的抗（抑）菌测试方法，被实验室广泛采用，操作相对简单易行、结果可靠。抑菌环法是利用抑菌剂不断溶解经琼脂平板扩散，使其周围的细菌、真菌生长受到抑制而形成抑菌环，通过测量抑菌环大小来判断该产品是否具有抑菌能力。

抑菌环试验是什么？

2012版《消毒技术规范》中提及的抑菌环试验是采用的滤纸片法，试验需准备5mm直径圆形新华一号定性滤纸片，经压力蒸汽灭菌处理后，置120℃烤干2h，保存备用，且对于需进行试验的液体产品及溶出性产品分别做了方法说明。对于液体抑菌剂，需在每片滤纸上滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20微升，将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置37℃温箱中烤干，或置室温下自然干燥备用。

对于溶出性抗（抑）菌产品，方法里写明可直接制成直径为5mm，厚不超过4mm圆片（块）来进行试验，但从实际操作来看，尤其对于一些半固态的，如膏霜、牙膏等粘稠产品，将产品直接制成这个指定规格的圆块并不容易操作，规格大小也很难统一，试验结果存在较大误差。

因此，待测产品如若类似膏霜、牙膏等粘稠产品一类，若注明是对一定稀释比例的样液进行测试，那可按照《消毒技术规范》中的滤纸片法进行试验。若要求注明直接对原倍样品进行测试，则此法不宜选用，需要进行适当改进，既要便于试验操作且尽可能减小试验误差，确保数据准确性。

抑菌环试验：牛津杯法

1、菌悬液的制备

将培养18~24小时的新鲜斜面培养物用PBS洗下，利用比浊法稀释至所需使用的浓度，4℃备用。

2、试验平板的制备

向融化并冷至40℃-45℃的培养基中接入试验菌悬液（1%），混匀，使培养基含菌浓度为5×105CFU/mL～5×106 CFU/mL，倾注到平皿内，每皿约15mL-20 mL，转动平皿，使菌液与培养基混匀，静置凝固。

3、摆放牛津杯

牛津杯（内径6mm、外径8mm、高10mm），以无菌操作将灭菌的牛津杯，等距离均匀垂直放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，每个平板放3支牛津杯。

4、加入产品

用吸管将牙膏产品加入牛津杯中，由于样品粘稠流动性较差，加样操作要注意，确保加入样品与培养基表面接触无空隙。（与打孔法进行对比试验，加入产品量为0.15ml）

5、培养及测量

盖好平皿，置37℃培养箱，培养16h～18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径并记录。测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行测量，其直径应以抑菌环外沿为界。

抑菌环试验：打孔法

1、菌悬液的制备

将培养18～24小时的新鲜斜面培养物用PBS洗下，利用比浊法稀释至所需使用的浓度，4℃备用。

2、试验平板的制备

向融化并冷至40℃-45℃的培养基中接入试验菌悬液（1%），混匀，使培养基含菌浓度为5×105CFU/mL～5×106 CFU/mL，倾注到平皿内，每皿约15mL-20 mL，转动平皿，使菌液与培养基混匀，静置凝固。

3、培养基打孔

经测量，10-100微升的微量移液器枪头，其孔径与牛津杯内径尺寸几乎一致，因此选用该型号枪头用于培养基打孔。打孔时注意一次打孔，不可转动枪头，防止平板琼脂出现裂缝，对结果造成影响，打完孔用无菌针头将琼脂孔中的培养基挑出，每次用针头后要用酒精灯火焰灼烧灭菌。每个平板均匀打5个孔，4个孔加待测样品，中间1个孔加对照样品。

4、加入产品

用吸管将牙膏产品加入到孔径中，由于样品粘稠流动性较差，加样操作要注意，确保加入样品充满各孔径。（与牛津杯法进行对比试验，加入产品量为0.15ml）

5、培养及测量

盖好平皿，置37℃培养箱，培养16h～18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径并记录。测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行测量，其直径应以抑菌环外沿为界。