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体外抗菌性能评价方法有哪些?如何评价抗菌剂杀菌效果?
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  • 2023-10-13

流行病等细菌感染相关疾病是对公共卫生的主要威胁,已成为全球的十大死亡原因之一。因此,迫切需要新的、高效的策略来对抗细菌感染,并有大量的努力致力于开发替代抗菌剂。抗菌剂的杀菌效果如何,需要通过一系列体外抗菌实验来验证。


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作为第三方检测中心,中科检测机构拥有CMA认证检测资质,检测设备齐全,数据科学可靠,可出具国家认可的体外抗菌性能评价报告。


体外抗菌性能评价方法:孔径抑菌法


孔径抑菌法是一种简单常用的体外抗菌测定方法。其原理是将待测物质溶解于培养基中,然后在琼脂平板上制作不同直径的孔洞,将待测物质溶液滴入孔洞中,观察细菌在孔洞周围的生长情况。如果待测物质具有抑菌作用,则孔洞周围会出现无菌区域。


操作步骤:


1.准备琼脂平板和待测物质溶液。


2.在琼脂平板上制作不同直径的孔洞。


3.将待测物质溶液滴入孔洞中。


4.培养-定时间后,观察孔洞周围的生长情况。


体外抗菌性能评价方法:最小抑菌浓度法


最小抑菌浓度法是一种定量评估待测物质对细菌生长的抑制能力的方法。其原理是在一系列浓度梯度的待测物质溶液中接种细菌,通过观察最低有效浓度来评估其抗菌活性。


操作步骤:


1.准备-系列待测物质溶液,浓度递增。


2.在试管中加入一定浓度的待测物质溶液和细菌悬液。


3.培养-定时间后,观察细菌生长情况。


4.根据最低有效浓度判断待测物质的抗菌活性。


体外抗菌性能评价方法:平板计数法


抗菌剂对细菌进行杀菌处理以后,将细菌稀释到合适的倍数进行平板涂布并对长出的菌落进行计数。通过计算细菌存活率或者致死率来表征抗菌剂抗菌效果。


体外抗菌性能评价方法:活死染色法


对细菌进行活死染色也是一种常用的表征抗菌效果的方法。抗菌剂对细菌进行处理后,再对细菌进行活死染色。


目前有许多品牌的细菌活死染色试剂盒,以SYTO-9和PI为例,SYTO-9是一种能够透过细胞膜的绿色荧光核酸染料,可用于活的和死的真核细胞的RNA和DNA染色,以及革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。


PI是一种可对DNA染色的细胞核染色剂,在嵌入双链DNA后释放红色荧光。PI不能穿透完整细胞膜,但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透,并使细胞核红染。


体外抗菌性能评价方法:清除生物膜法


近年来,随着医学界对某些环境中常见细菌所致的一些慢性和顽固性疾病的深入了解,发现生物膜(生物被膜)是导致这些细菌性疾病难以根治的主要原因。


以生物膜形式存在的细菌对抗生素等杀菌剂、恶劣环境及宿主免疫防御机制有很强的抗性,因此评价抗菌剂对生物膜的抑制效果也是评价抗菌剂杀菌效果的标准之一。


通过结晶紫染色观察生物膜剩余面积或者测其OD值可以表征抗菌剂对生物膜的抑制效果。另外也可以用过荧光共聚焦成像来表征对生物膜的抑制效果。


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