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体外抗菌实验方法有几种?体外抗菌实验的样品要求
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  • 2023-10-24

体外抗菌实验是在体外条件下,测定细菌/真菌对测试样品的敏感程度。抗菌剂的杀菌效果如何,需要通过一系列体外抗菌实验来验证。


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作为第三方检测中心,中科检测机构拥有CMA认证检测资质,检测设备齐全,数据科学可靠,可出具国家认可的体外抗菌实验检测报告。


抗菌实验:抑菌圈测试


1、块体类-薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等


送样量:至少3个/种菌。


制样要求:金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形,建议制备直径为6-10 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪,默认制备直径为6 mm。


注:凝胶样本须保证样本在培养条件下(一般为37℃)不融化。


2、液体类


送样量:根据测试时样本浓度而定


①若采用原液测试,则样本量为1 mL/种菌;


②若采用稀释后样本测试,则须告知稀释倍数及稀释液,样本量为1 mL/稀释倍数/种菌。


3、粉末类


送样量:因不同样本密度不同,无法保证每个加样孔均能加入等量样本,故建议样本做分散液,按照等体积加样(每个孔最大加样量为0.2 mL),能提升样本量的一致性。需要提供质量/体积比(选择合适的样本分散液),样本量为质量/体积×1 mL/种菌。


如果不可使用分散液,需要预试,样本量可联系本公司人员确认。


抗菌实验:OD值测试


1、块体类-薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等


送样量:需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液,样本量为4X g/种菌。


2、液体类(要求样本溶液无色或者淡色)


送样量:根据测试时样本的溶剂和浓度而定


①若溶剂具备杀菌性(如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等),推荐提供样本浓度为50倍测试浓度,样本量为0.1 mL/种菌。


举例:测试材料的溶剂为DMSO,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.1 mL/种菌。


②若溶剂不具备杀菌性(如PBS、纯水、生理盐水等),推荐提供样本浓度为10倍测试浓度,样本量为0.4 mL/种菌。


举例:测试材料的溶剂为纯水,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.4 mL/种菌。


注:如果提供样本原液浓度高于推荐浓度,可按比例计算样本量。


3、粉末类


送样量:需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液,样本量为4X g/种菌。


抗菌实验:平板涂布计数测试


1、块体类-薄膜、金属块、镀膜玻璃等(具备一定的表面积)


测试方法参考国标GBT 31402-2015 塑料 塑料表面抗菌性能试验方法、JCT 1054-2007 镀膜抗菌玻璃


送样量:样本量为1个/次重复/种菌


样本尺寸:标准尺寸大小5×5cm,建议最小尺寸1×1cm


2、液体类


送样量:根据测试时样本的溶剂和浓度而定


①若溶剂具备杀菌性(如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等),推荐提供样本浓度为50倍测试浓度,样本量为0.03 mL/次重复/种菌。


举例:测试材料的溶剂为DMSO,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.03 mL/次重复/种菌。


②若溶剂不具备杀菌性(如PBS、纯水、生理盐水等),推荐提供样本浓度为10倍测试浓度,样本量为0.1 mL/次重复/种菌。


举例:测试材料的溶剂为纯水,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.1 mL/次重复/种菌。


3、粉末类


送样量:需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液,样本量为X g/次重复/种菌。


抗菌实验:MIC/MBC测试


1、粉末/液体类(要求样本溶液,完全溶解且无色或者淡色)-微孔板法


送样量:根据测试时样本的溶剂和初始工作浓度而定


①若溶剂具备杀菌性(如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等),推荐提供样本浓度为50倍测试浓度,样本量为0.03 mL/种菌。


举例:测试材料的溶剂为DMSO,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.03 mL/种菌。


②若溶剂不具备杀菌性(如PBS、纯水、生理盐水等),推荐提供样本浓度为10倍测试浓度,样本量为0.1 mL/种菌。


举例:测试材料的溶剂为纯水,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.1 mL/种菌。


注:如果提供样本原液浓度高于推荐浓度,可按比例计算样本量。


如果样本为粉末,可按照浓度和所需体积计算样本量(<10 mg者,需称量并标记清楚,避免样本量较少情况下再反复称量造成损耗)。


2、粉末/液体类(样本颜色较重)-平板法


送样量:根据测试时样本工作浓度和浓度个数而定。比如工作浓度为X g/mL(或?M),测试n个浓度,样本量为60X*n g(或10X ?M的液体样本6*n mL)


3、液体类(样本属于分散液或制备成分散液,且呈无色或者淡色)-试管法


送样量:根据测试时样本工作浓度而定


①若分散剂具备杀菌性(如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等),推荐提供样本浓度为50倍测试浓度,样本量为2 mL/种菌。


举例:测试材料的分散剂为DMSO,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本2 mL/种菌。


②若分散剂不具备杀菌性(如PBS、纯水、生理盐水等),推荐提供样本浓度为10倍测试浓度,样本量为10 mL/种菌。


举例:测试材料的分散剂为纯水,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本10 mL/种菌。


4、粉末类(直接加样)-试管法


送样量:根据测试时样本的工作浓度而定。比如工作浓度为X mg/mL(g/mL),则样品量为30X mg(g)/种菌。