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体外抗菌实验方法有哪几种?抗菌实验包括哪些
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  • 2024-01-30

体外抗菌实验是指体外测定微生物对药物敏感程度的实验,该实验称为抗菌实验,分为抑菌实验和杀菌实验,前者是抑制细菌的生长繁殖,但不能杀菌,在药物去除后,微生物还可以继续生长。


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作为第三方检测中心,中科检测机构拥有CMA认证检测资质,检测设备齐全,数据科学可靠,可出具国家认可的体外抗菌实验报告。


体外抗菌实验方法


1、OD值测试(适合无颜色干扰、可溶性样品);


2、抑菌圈测试(适合活性成分可以溶出的样品);


3、振荡培养+平板涂布计数法(可用于不溶性样品抗菌活性评价);


4、MIC测试(适合已验证过具有抗菌活性且无颜色干扰的可溶性样品);


5、MBC测试(适合已检测过具有最小抑菌浓度的样品);


如果之前没有做过抗菌实验,建议先做简单的抑菌圈或者OD值评估下抗菌效果。


体外抗菌实验样品要求


1、抑菌圈测试


1.1块体类-薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等


送样量:至少3个/种菌。


制样要求:金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形,建议制备直径为6-10 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪,默认制备直径为6 mm。


注:凝胶样本须保证样本在培养条件下(一般为37℃)不融化。


1.2液体类


送样量:根据测试时样本浓度而定


①若采用原液测试,则样本量为1 mL/种菌;


②若采用稀释后样本测试,则须告知稀释倍数及稀释液,样本量为1 mL/稀释倍数/种菌。


1.3粉末类


送样量:因不同样本密度不同,无法保证每个加样孔均能加入等量样本,故建议样本做分散液,按照等体积加样(每个孔最大加样量为0.2 mL),能提升样本量的一致性。需要提供质量/体积比(选择合适的样本分散液),样本量为质量/体积×1 mL/种菌。


如果不可使用分散液,需要预试,样本量可联系本公司人员确认。


2、OD值测试


2.1块体类-薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等


送样量:需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液,样本量为4X g/种菌。


2.2液体类(要求样本溶液无色或者淡色)


送样量:根据测试时样本的溶剂和浓度而定


①若溶剂具备杀菌性(如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等),推荐提供样本浓度为50倍测试浓度,样本量为0.1 mL/种菌。


举例:测试材料的溶剂为DMSO,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.1 mL/种菌。


②若溶剂不具备杀菌性(如PBS、纯水、生理盐水等),推荐提供样本浓度为10倍测试浓度,样本量为0.4 mL/种菌。


举例:测试材料的溶剂为纯水,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.4 mL/种菌。


注:如果提供样本原液浓度高于推荐浓度,可按比例计算样本量。


2.3粉末类


送样量:需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液,样本量为4X g/种菌。


3、平板涂布计数测试


3.1块体类-薄膜、金属块、镀膜玻璃等(具备一定的表面积)


测试方法参考国标GBT 31402-2015 塑料 塑料表面抗菌性能试验方法、JCT 1054-2007 镀膜抗菌玻璃。


送样量:样本量为1个/次重复/种菌


样本尺寸:标准尺寸大小5×5cm,建议最小尺寸1×1cm


3.2液体类


送样量:根据测试时样本的溶剂和浓度而定


①若溶剂具备杀菌性(如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等),推荐提供样本浓度为50倍测试浓度,样本量为0.03 mL/次重复/种菌。


举例:测试材料的溶剂为DMSO,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.03 mL/次重复/种菌。


②若溶剂不具备杀菌性(如PBS、纯水、生理盐水等),推荐提供样本浓度为10倍测试浓度,样本量为0.1 mL/次重复/种菌。


举例:测试材料的溶剂为纯水,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.1 mL/次重复/种菌。


3.3粉末类


送样量:需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液,样本量为X g/次重复/种菌。


4、MIC/MBC测试


4.1粉末/液体类(要求样本溶液,完全溶解且无色或者淡色)-微孔板法


送样量:根据测试时样本的溶剂和初始工作浓度而定


①若溶剂具备杀菌性(如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等),推荐提供样本浓度为50倍测试浓度,样本量为0.03 mL/种菌。


举例:测试材料的溶剂为DMSO,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.03 mL/种菌。


②若溶剂不具备杀菌性(如PBS、纯水、生理盐水等),推荐提供样本浓度为10倍测试浓度,样本量为0.1 mL/种菌。


举例:测试材料的溶剂为纯水,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.1 mL/种菌。


注:如果提供样本原液浓度高于推荐浓度,可按比例计算样本量。


如果样本为粉末,可按照浓度和所需体积计算样本量(<10 mg者,需称量并标记清楚,避免样本量较少情况下再反复称量造成损耗)。


4.2粉末/液体类(样本颜色较重)-平板法


送样量:根据测试时样本工作浓度和浓度个数而定。比如工作浓度为X g/mL(或?M),测试n个浓度,样本量为60X*n g(或10X ?M的液体样本6*n mL)


4.3液体类(样本属于分散液或制备成分散液,且呈无色或者淡色)-试管法


送样量:根据测试时样本工作浓度而定


①若分散剂具备杀菌性(如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等),推荐提供样本浓度为50倍测试浓度,样本量为2 mL/种菌。


举例:测试材料的分散剂为DMSO,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本2 mL/种菌。


②若分散剂不具备杀菌性(如PBS、纯水、生理盐水等),推荐提供样本浓度为10倍测试浓度,样本量为10 mL/种菌。


举例:测试材料的分散剂为纯水,测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本10 mL/种菌。


4.4粉末类(直接加样)-试管法


送样量:根据测试时样本的工作浓度而定。比如工作浓度为X mg/mL(g/mL),则样品量为30X mg(g)/种菌。


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