技术文章
新闻资讯
INFORMATION CENTER
新闻资讯 技术文章 化妆品祛斑美白功效测试方法详解:生化测试和细胞测试法
化妆品祛斑美白功效测试方法详解:生化测试和细胞测试法
  • 57次
  • 2024-06-26

    随着化妆品备案注册信息服务平台上线以后,功效宣称评价报告及相关依据文献成为其必须提交资料之一。根据《化妆品功效宣称评价规范》中的要求,宣称祛斑美白类化妆品只需要做人体功效评价试验即可。但随着化妆品功效评价法规的完善以及化妆品功效评价技术的不断发展,化妆品体外功效评价手段也日渐丰富。化妆品体外功效试验(即“实验室试验”)主要包括物理化学法、生物化学法、细胞生物法和3D重组皮肤模型。


31919592.jpg


    中科检测是专业的化妆品检测与功效评价中心,经国家药品监督管理部门确认可承担化妆品注册和备案检验等工作,可提供化妆品祛斑美白功效评价试验服务。


    一、生化测试-蘑菇酪氨酸酶抑制测试


    基本原理:酪氨酸酶是黑色素合成途径中的限速酶,它主要通过影响酪氨酸酶转化成多巴,以及多巴氧化为多巴醌来影响黑色素的生成。因此,可以通过测定美白剂对酪氨酸酶的抑制结果来评价其功效。常用生化酶法测定酪氨酸酶活性,其原理是酪氨酸或多巴在酪氨酸酶的作用下转化为多巴醌,该反应是呈色反应,通过比色法测定,判断不同美白剂对于酪氨酸酶活性的抑制率。


    实验系统:蘑菇酪氨酸酶


    二、细胞测试-黑色素和酪氨酸酶含量测试


    基本原理:小鼠B-16黑素瘤细胞是常用的研究黑色素的细胞模型,可用于研究美白化妆品对细胞内酪氨酸酶的作用及其对细胞黑素合成的影响。酪氨酸酶的催化作用主要发生在酪氨酸转化成多巴和多巴转化为多巴醌这两个反应中。因此,一大类美白剂的作用是通过抑制酪氨酸酶的活性,减少黑色素的生成,从而达到美白的目的。


    实验步骤:


    1、筛查样品细胞毒性


    2、选择CV80以上的安全浓度


    3、测试B16细胞酪氨酸酶活性抑制和B16细胞黑色素含量测定


    三、动物模型


    动物模型与体外模型相比,更贴近于人体实际生理环境,能对实际使用情况有更好的模拟。常用的动物功效模型有豚鼠模型和斑马鱼胚胎模型。


    1.豚鼠皮肤模型


    豚鼠皮肤模型利用黑色或棕色的成年豚鼠,黄棕色豚鼠中含有的黑素细胞与黑素小体的分布与人体表皮非常接近,对人体皮肤环境有较好的模拟。豚鼠皮肤模型利用黑色或棕色的成年豚鼠,通过对豚鼠皮肤状态进行生化分析可以进行机理研究。实验区域为豚鼠剃去毛发的背部皮肤,照射紫外线使皮肤形成色素斑,连续涂敷实验物质。通过对给药后的豚鼠皮肤组织做组织切片,部分对DOPA显阳性的细胞和黑色素颗粒细胞进行计数,与空白组相比较可得美白功效成分抑制黑色素生成的效果。


    豚鼠的培育较为费时,且实验周期较长,不适用于高通量筛选。豚鼠实验涉及动物伦理问题,出于人文关怀以及伦理要求,尽可能减少豚鼠模型实验是化妆品功效测评大势所趋。


    2.斑马鱼模型


    斑马鱼的神经嵴有三种色素细胞,分别是载黑色素细胞、黄色素细胞和虹细胞,相较于其他动物模型成本较低,是一种非常适合美白功效成分高通量筛选的模型。斑马鱼胚胎模型给药方式简单,将美白功效成分溶解在胚胎培养溶液中即可给药。在体式显微镜下,可以直接观察到美白功效成分对斑马鱼胚胎发育的影响以及体表黑色素生成情况。同样可以通过分子生物学实验对黑色素合成过程中相关酶mRNA、DNA的表达水平及酪氨酸酶合成量进行测定,以评价美白功效成分的药理学机制以及对斑马鱼胚胎内信号通路的影响。斑马鱼胚胎模型既规避了动物伦理相关问题,又能满足了整体动物模型研究需求。