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新闻资讯 技术文章 药物体外抗菌试验方法有哪些?琼脂扩散法有哪些方法?
药物体外抗菌试验方法有哪些?琼脂扩散法有哪些方法?
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  • 2024-06-28

    药物的体外抗菌试验又称药敏试验,主要用于筛选抗菌药物或测定细菌对药物的敏感性。药物的体外抗菌试验是一种在实验室条件下进行的测试,用于评估药物对细菌的抑制或杀灭能力。这种试验在药物开发、临床应用和抗菌效果评估中具有重要作用。


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    体外抗菌试验是抗菌药物研究和应用的重要工具,有助于提高治疗效果,减少耐药性的发展,并为临床合理用药提供科学依据。在抗菌药物的研究与开发中,体外抗菌试验是评估新化合物抗菌潜力的基础步骤。在药物生产过程中,通过体外抗菌试验确保产品质量和效果。


    中科检测开展药物体外抗菌试验服务,具备CMA、CNAS资质认证,检测报告可用于原料及产品备案及产品研发,贸易凭证等。


    (一)稀释法(结果示教)


    稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法(斜面法)两种。这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度(MIC):是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度,通常用μg∕ml或U/ml表示。


    (二)琼脂扩散法


    它是将抗菌药物加至接种试验菌的平板表面,抗菌药物在琼脂胶内向四周自由扩散,其浓度随扩散距离增大而降低,在药物一定的扩散距离内,由于药物的抗菌效应,试验菌不能生长,此无菌生长的范围称为抑菌圈,抑菌圈的大小与药物的抑菌效应成正比。


    琼脂扩散法常有纸片法、管碟法、打洞法和挖沟法。


    滤纸片法(K-B纸片法)


    滤纸片法是最常用的方法,适用于新药的初筛试验(初步药物是否有抗菌作用)及临床的药敏试验(细菌药物第三性试验、以便选择用药)。滤纸片分湿、干两种,可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面,也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。


    至于干燥纸片的制备方法:选用吸水力强而且质地均匀的滤纸,用打洞机制成6mm直径的圆纸片,120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液,每100张纸片加入0.5ml药液,使它均匀浸润,放在无菌平皿中,37℃,使它干燥,分装小瓶中,封口,4℃保存。如果是β-内酰胺类抗生素还


    要放在-20℃保存。这就制成了干燥的含药液的纸片。一般药敏试验常采用滤纸片法,我们可以根据抑菌圈的大小,来判断菌种对药物的敏感性,是敏感,中度敏感还是耐药。世界卫生组织规定了抗菌药物的敏感性评定标准,在标准实验条件下根据抑菌圈大小来判断。


    步骤:


    活化试验菌→涂布试验菌于平板→贴加含药纸片→37度培养24h→观察结果


    打洞法(结果示教)


    在含菌琼脂平板上打洞(一般打6个孔,4个小孔加不同浓度标准溶液,另外2个小孔加血清样品,放在37℃,12-18小时,测定其抑菌圈直径。所以说微量法适于药物血浓度的监测。优点是微量(血清用量少)敏感,操作简便。


    管碟法(结果示教)


    与打洞法原理相同,只是把药液加入放到琼脂板上的牛津杯中。加药量相对比较多,适合中药的体外抗菌试验。


    挖沟法(结果示教)


    方法是先制备普通琼脂平板,并在平板上挖直沟,在沟内滴加药液,在沟侧接种细菌。经过培养以后观察家细菌生长的情况。我们可以根据沟和细菌间的抑菌距离的长短,来判断该药物对这些细菌的抗菌能力。