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化妆品眼刺激试验:基于鸡胚绒毛膜尿囊膜的试验
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  • 2024-07-29

    眼刺激,在《化妆品安全技术规范》中的释义是,眼球表面,包括角膜、巩膜以及结膜部分,接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。急性眼刺激试验是用以确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物的眼睛是否有刺激作用及其程度。化妆品眼刺激试验可采用基于鸡胚绒毛膜尿囊膜的试验方法,即利用鸡胚绒毛膜尿囊膜(chicken chorioallantoic menbrane,CAM)与人结膜相似的特点开发的替代试验,以CAM为替代材料研究化妆品的眼刺激性。



    作为第三方检测中心,中科检测机构拥有CMA和CNAS认证检测资质,检测设备齐全,数据科学可靠,可出具国家认可的化妆品眼刺激试验报告。


    CAM试验优缺点


    优点:


    CAM模型相比其他体内模型,在研究血管形成和血管生物学方面具有多重优点,其中最显著的优点是容易获取并且生长迅速。CAM可以从一个没有血管的细胞膜在短时间内生长成薄层透明的组织,而仅需要7 d密集的血管网就覆盖了蛋壳内层,并且这些血管的生长蕴含了大量与生长所需的相关信息。另外,实验材料易获得、操作简单、实验周期短、不需要特殊设备、血管膜透明、结果易于观察


    缺点:


    CAM也存在一定的局限性,最主要的缺点是禽类与哺乳动物的差异,有关禽类的抗体、细胞因子等商品化供应比较少,而且哺乳动物来源的生物材料可能在鸡胚组织上不能发挥作用,因此基因操控的研究不够普遍且比小鼠困难。另外,CAM丰富的血管网是其优点,但其不足是很难区分新生毛细血管和已有血管。在实验延长至15 d后会发生非特定免疫反应,这可能会影响移植的成功。在化妆品评测中的应用主要集中在和血管发生、胚胎发育相关联方面。


    鸡胚绒毛膜尿囊膜试验(HET-CAM)


    试验方法:以0.3 ml受试物直接加至第10天鸡胚气室底部的CAM,观察出血、血管溶解和凝血(大中血管内血栓形成或鸡胚蛋白混浊)等终点,计算刺激评分(irritation score. IS)


    评价标准:预测模型可采用反应时间法(即测定每一种反应终点出现的时间)或刺激阈值法(即测定导致上述毒性终点发生的受试物浓度)。


    HET-CAM主要适用于无刺激到轻度刺激物的预测或筛选,对中度以上的刺激物应补充其它实验确认。适合HET-CAM检测的化合物包括多种类型液体原料和产品,特别适用于表面活性剂和表面活性剂配方,对固体、不溶性或粘稠物质的测试重复性较差,色素和染料测试应慎重。


    绒毛膜尿囊膜血管试验 (CAMVA)


    试验方法:在4日龄受精鸡胚上开口,抽取去除约3 mL蛋清,人为造成CAM。第10天时,将不同浓度稀释的受试物直接暴露于CAM中的“O”形特富龙环,孵育30 min后观察CAM血管变化,包括出血、充血、鬼影血管等,将使50%的受精鸡胚出现反应的受试物浓度(RC50)作为检测终点。


    评价标准:计算使50%的鸡胚出现上述损伤的受试物浓度。RC50>3%,无刺激性;RC50≤3%,有刺激性。


    CAMVA法适用于轻度到中度眼刺激性化合物的检测,也可正确区分刺激物和非刺激物,但不能用于严重刺激性物质的分类。适于检测物质的类型同HET-CAM法。