在海洋生态系统的研究与监测中，海水铁细菌的检测是一个重要的环节。铁细菌作为一类特殊的微生物，对海洋环境有着多方面的影响。海水铁细菌检测对于了解海洋生态环境、保障海洋工程设施安全等方面具有重要意义。通过严格遵循 HY/T 176 - 2014 标准的检测方法，能够准确获取海水中铁细菌的相关信息，为海洋环境的保护和管理提供有力支持。《海水中铁细菌的测定 MPN 法》HY/T 176 - 2014 标准为准确测定海水中铁细菌提供了科学规范的方法。

　　中科检测是第三方检测机构，可提供一系列海水铁细菌检测服务，并出具权威报告。

　　铁细菌检测必要性

　　铁细菌是一类能将溶于水中的棕色亚铁离子转变为不溶于水的褐色或黑色三氧化二铁水合物的细菌。

　　它们在海洋环境中广泛存在，其活动会对海水的物理化学性质以及海洋生态系统产生重要影响。一方面，铁细菌的代谢活动可能导致管道、设备等的腐蚀，影响海洋工程设施的安全和使用寿命。

　　另一方面，铁细菌的大量繁殖可能改变海洋中营养物质的循环和分布，对海洋生物的生存和繁衍产生间接影响。此外，通过检测海水中铁细菌的数量和分布，还可以为海洋环境质量的评估提供重要依据，有助于及时发现海洋生态系统的潜在问题。

　　铁细菌检测方法详解

　　1、方法原理

　　本方法采用多管发酵技术，在（29±1）℃的条件下培养 14 天。如果试管中棕色消失且形成褐色或黑色沉淀，表明发生阳性反应，然后采用 MPN（most probable number，最可能数）法对被测试样中的铁细菌进行计数。MPN 法是应用概率理论来估算细菌浓度的方法。

　　2、 试剂与材料

　　试验所需试剂与材料众多，除特殊规定外，需使用分析纯试剂和符合 GB/T 6682 中三级水规格的水。具体包括硫酸镁、硫酸铵、磷酸氢二钾、无水氯化钙、硝酸钠、柠檬酸铁铵、硫代硫酸钠、陈海水（取自未污染海域，装入玻璃瓶后储放在暗处 15 天以上的海水）、按 GB/T 16310.1 - 1996 配制的人工海水、氢氧化钠溶液、盐酸溶液以及牛皮纸等。

　　3、仪器与设备

　　1）无菌操作相关设备：无菌箱（室）或超净工作台，用于保证操作环境的无菌状态。

　　2）灭菌设备：蒸汽压力灭菌器，用于对试管、吸管等器具进行灭菌处理。

　　3）培养设备：生化培养箱（控制温度为（29±1）℃），为铁细菌培养提供适宜温度。

　　4）其他设备：还包括电热干燥箱、电热恒温水浴锅、天平、冰箱、振荡器、刻度吸管或移液器、量筒、烧杯、无菌试管、无菌刻度吸管或移液器和 Tip 头、无菌采样瓶、试管架以及 pH 计或精密 pH 试纸（测量范围 6.4 - 8.0）等。

　　4、分析检测

　　1）水样的采集：使用灭菌采样瓶采集被测样品，采样过程中要保护瓶口和颈部，防止杂菌污染，瓶内要留有足够空间以便测定前摇匀。若水样中有余氯或不确定是否有余氯，需在采样前加入硫代硫酸钠，每升水样约加 0.1g；若确定无余氯，则无需添加。水样采集后应立即测定，若 2 小时内不能测定，需在冰箱中冷藏保存，保存时间不宜超过 24 小时。冷藏后的水样测定时，需先在生化培养箱中活化 4 - 5 小时。

　　2）水样的稀释和接种：按 10 倍稀释法对水样进行系列稀释，使最后一个稀释度接种培养后无铁细菌生长。将不同稀释度的水样分别接种到已灭菌装有培养基的试管中，每个稀释度重复接种 3 - 5 管，每接种 1mL 需更换一支无菌吸管或 Tip 头。另取一组已灭菌装有培养基的试管，接种 1mL 无菌稀释水作为空白对照，且整个操作需采取无菌操作方法。

　　3）培养：将接种后的试管在生化培养箱中，于（29±1）℃培养 14 天。

　　5、计数与报告

　　1）若试管中产生褐色或黑色沉淀且原培养基中棕色消失变为透明状，表明有铁细菌存在，以“+”（阳性）表示，否则以“-”（阴性）表示。若空白对照出现阳性反应，说明测定过程有污染，本次测定无效。

　　2）数出 10 进位稀释管中阳性试管数，当阳性组合指数记录下来。若在 10 进位稀释中多于三个稀释度时，只需用其中依次的三个稀释度。以每个稀释度接种 5 管为例，先选出 5 管全部阳性反应的最大稀释度，再选出与其相连的两个更高稀释度，算出阳性组合指数。若有更高稀释度仍产生一个阳性试管，应将其并入所选择的最高稀释度的阳性结果中。

　　3）根据阳性组合的指数，查附录得出最大可能菌数，除以阳性组合指数的第一位数字的稀释度数，即为每毫升水样中铁细菌的菌数。报告方式按照标准中的表格执行。