400-133-6008
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2025-03-19
消毒剂细菌回复突变试验，又称Ames试验，是一种用于检测消毒剂是否具有致突变性的体外毒理学测试方法。该试验通过观察受试物能否引起特定突变菌株的基因回复突变，从而评估其潜在的遗传毒性。
细菌回复突变试验利用营养缺陷型菌株（如鼠伤寒沙门氏菌或大肠杆菌）检测受试物是否引起基因突变。这些菌株在特定基因上发生突变，无法合成某些必需氨基酸（如组氨酸或色氨酸），因此只能在含有这些氨基酸的培养基上生长。当受试物引起回复突变时，菌株重新获得合成能力，可在无氨基酸的培养基上生长并形成可见菌落，从而评估受试物的致突变性。
消毒剂细菌回复突变试验方法步骤
（1）试验步骤
菌株准备：将菌株接种于营养肉汤培养基中，37℃振荡培养10小时或静置培养16小时，使活菌数达到1×10⁹/mL～2×10⁹/mL。
培养基制备：底层培养基倒入无菌培养皿中，静置凝固。顶层培养基融化后分装于无菌试管，每管2mL，45℃水浴保温。
受试物处理：在保温的顶层培养基中依次加入菌液和受试物（需活化时加入10%S9混合液），混匀后迅速倾倒在底层培养基上，静置凝固。
培养与观察：将培养皿放入37℃培养箱中培养48小时，观察并计数回复突变菌落数量。必要时延长至72小时。
（2）试验方法
平板掺入法：将受试物与菌液混合后直接加入顶层培养基，倾倒在底层培养基上，培养后观察菌落。
点试法：在顶层培养基上放置无菌滤纸片，滴加受试物或将固体受试物结晶置于纸片或琼脂表面，培养后观察菌落。
预培养法：将受试物与菌液在37℃预培养20分钟或30℃预培养30分钟，再加入顶层培养基，后续步骤同平板掺入法。
（3）结果判定
阳性结果：回复突变菌落数为阴性对照的两倍以上，且具有剂量-反应关系，表明受试物具有致突变性。
阴性结果：回复突变菌落数与阴性对照无显著差异，表明受试物无致突变性。
（4）注意事项
试验条件：试验需在严格控制的实验条件下进行，确保结果的准确性和可靠性。
伦理要求：涉及动物试验时，需遵守实验动物福利原则，减少动物痛苦。
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