细菌回复突变试验又称Ames试验，是一项检测基因突变的体外致突变性试验，通过检测受试物对微生物（细菌）的基因突变作用，预测其遗传毒性和潜在的致癌作用。细菌回复突变试验利用鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌来检测点突变，涉及DNA的一个或几个碱基对的置换、插入或缺失。

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试验菌株

细菌回复突变试验至少应采用5种菌株，包括用于检测组氨酸靶基因中鸟嘌呤-胞嘧啶（G-C）位点碱基置换或移码突变的4种组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌（TA98；TA100；TA1535；TA1537/TA97/ TA97a），以及用于检测组氨酸或色氨酸基因中腺嘌呤-胸腺嘧啶（A-T）位点碱基置换与检测交联剂的鼠伤寒沙门氏菌TA102或大肠杆菌WP2 uvrA或大肠杆菌WP2 uvrA（pKM101）。

新获得的或者长期保存的菌种，在试验前需要进行菌株的生物特性鉴定。鉴定的判断标准应满足《化妆品安全技术规范》的要求。

代谢活化系统

一些具有致突变的物质需要代谢活化后才会引起细菌回复突变，因此细菌在加或不加代谢激活系统的情况下均应暴露于受试物。

最常用的代谢活化系统是用多氯联苯（PCB混合物）或用苯巴比妥和 β-萘黄酮组合处理的哺乳动物（大鼠）肝脏微粒体酶（S9）。S9在S9混合液中的浓度一般为5%～30%（v/v）。代谢活化系统的选择和条件取决于所测试化学物质的类别。在某些情况下，可能需要使用两种或两种以上浓度的S9；对于偶氮染料和重氮化合物，更适合使用还原性代谢活化系统。

受试物的处理

受试物应采用工艺相对稳定、纯度和杂质含量能反映上市样品质量和安全性的样品。

在处理细菌之前，应将固体受试物溶解或悬浮在适当的溶剂或溶媒中，并在必要时进行稀释。液体受试物可以直接添加到测试系统中和/或在处理之前进行稀释。

受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。

对于化妆品终产品，应按照产品使用方法配制受试物，并明确配制方法和使用浓度。如为染发产品，应按照产品使用方法或产品使用说明书中各剂型的配制比例进行配制，如有多种配制比例，则需进行多个比例受试物的配制。配制后的受试物如需进一步稀释，则应选用合适的溶剂并设阴性对照。

对于化妆品新原料，应根据原料的溶解性选择适宜的溶剂进行配制或稀释，并设阴性对照。

溶剂的选择

所用溶剂应不与受试物发生反应，对试验菌株毒性低且无致突变性。首选灭菌蒸馏水/去离子水，对于不溶于水的受试物可选择其他溶剂，常用的有二甲基亚砜（DMSO）、丙酮、95%乙醇。

最高浓度的确定

细菌回复突变试验中受试物的最高浓度主要取决于受试物对细菌的毒性和溶解度。细菌自发回变数的减少，背景菌变得清晰或被处理的培养物细菌存活数减少都是毒性的标志。

对原料而言，一般最高剂量组可为5mg/皿或5?L/皿。对产品而言，有杀菌作用的受试物，最高剂量可为最低抑菌浓度，无杀菌作用的受试物，最高剂量可为原液。受试物至少应设四个剂量组。每个剂量均做三个平行平板。

用细菌回复突变试验检测某些受试物时，在不溶解的浓度范围内也能检测出剂量相关性的遗传毒性。建议采用以下方法检测相对不溶的受试物：

如果沉淀不干扰计数，应对产生沉淀的浓度进行计数，且最高浓度不超过5mg/皿或5µL/皿。当未观察到细菌毒性时，应以产生沉淀的最低浓度作为计数的最高浓度；当观察到剂量相关的细菌毒性或诱变性时，应按可能产生毒性时的要求来确定最高浓度。

对于初始实验，应至少使用五种不同的可分析浓度的测试物质，各测试点之间的间隔约为 。在研究剂量-反应关系时，可以适当缩小测试点之间间隔。

对照组的设置

试验应同时设阳性对照组、溶剂对照组和未处理（空白）对照组，包括加和不加S9两种情况。

阳性对照物要根据采用的菌株进行选择，并选择合适的剂量以保证每次试验的有效性。

一般选择已知的阳性诱变剂，如《化妆品安全技术规范》中收录的叠氮化钠、2-氨基蒽、敌克松、苯并（a）芘等。