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体外抗菌活性检测样品的制备以及常见的问题
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  • 2024-06-28

    抗菌药物是防治细菌感染性疾病的一类药物,种类多样,包括常用的青霉素类、头孢菌素类、β-内酰胺类等多种抗生素药物。抗菌活性常用于抗菌药物相关性能测定,其抑制或杀灭微生物的能力即称为抗菌活性,对于临床指导用药有重要意义。


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    中科检测开展各种原料及产品的体外抗菌活性检测服务,具备CMA、CNAS资质认证,检测报告可用于原料及产品备案及产品研发,贸易凭证等。


    体外抗菌活性检测指标


    抗菌活性可以测试OD值、抑菌圈、振荡+平板涂布计数法、MIC、MBC等五个指标


    1、OD值测试:适合无颜色干扰、可溶性样品,例如粉末(可溶/不可溶)、金属、布料、塑料薄膜、凝胶;


    2、抑菌圈测试:适合活性成分可以溶出的样品,以及液体样品;


    3、振荡培养+平板涂布计数法:可用于不溶性样品抗菌活性评价,例如粉末(可溶/不可溶)、金属、布料、塑料薄膜、凝胶;


    4、MIC测试:适合已验证过具有抗菌活性且无颜色干扰的可溶性样品,例如可溶粉末活液体


    5、MBC测试:适合已检测过具有最小抑菌浓度的样品;


    *如果之前没有做过抗菌实验,建议先做简单的抑菌圈或者OD值评估下抗菌效果。


    体外抗菌活性检测菌株


    中科检测体外抗菌活性检测提供的标准菌株有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、粘性放线菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌等。其他的菌株可以和工程师联系。


    待测菌株分类如下:


    革兰氏阴性菌代表:大肠杆菌(大肠埃希菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌);


    革兰氏阳性菌代表:金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌;


    真菌代表:白色念珠菌(白色假丝酵母)。


    体外抗菌活性检测结果解读


    1、抑菌圈测试


    抑菌圈测试一般用作样品抑菌性能的定性测试。若产生抑菌圈,则说明样品有一定的抗菌性。若无抑菌圈产生,说明该测试方法条件下样品无抗菌性。


    针对液体样本可能与浓度呈正相关,但并不意味着样本浓度越高,抑菌圈越大。因为测试样本对指定的测试菌株有一定的抑菌阈值,且抑菌性还与样本本身扩散性有关。


    取出培养完成的平板,采用十字交叉法,用游标卡尺测量抑菌圈(透明圈)直径(mm),以直径表示抑菌圈的大小。


    抑菌圈直径(mm)=抑菌圈外径(mm)—样品直径/打孔孔径(mm)


    2、OD值测试


    通过差异性分析,**P<0.01代表实验组与对照组相比,有极显著性差异;*P<0.05代表实验组与对照组相比,有显著性差异;P>0.05代表实验组与对照组相比,无差异性。


    若OD600值实验组与对照组有极显著/显著性差异减小,则说明材料对测试菌株有抗菌性。


    3、平板涂布计数测试


    计数原则依据国家标准GB4789.2-2016,选取菌落数在30CFU~300CFU之间来进行菌落计数。在最小稀释倍数下,若仍无菌落生长,则证明样品抑菌效果非常明显。


    菌液浓度(CFU/mL)计算方式:菌落数×稀释倍数×10(0.1mL稀释液涂布平板)


    抑菌率=(1-实验组菌液浓度/对照组菌液浓度)×100%


    4、MIC/MBC测试


    MIC(最小抑菌浓度,Minimalinhibitionconcentration)判定标准:眼观无细菌生长的最低药物浓度确定为MIC。


    MBC(最小杀菌浓度,Minimumbactericidalconcentration)判定标准:眼观清澈的孔/管摇匀,吸取0.1mL涂布于固体培养基,培养一定时间后计数,菌落数少于5个的最低稀释样品浓度确定为MBC。


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